期刊简介
本杂志由河北省卫生厅主管，河北医科大学口腔医学院主办，1987年创刊，为面向全国公开发行的口腔医学专业期刊，为口腔医学临床、科研、教学服务。除开辟基础研究、临床研究、专题报告、综述、讲座、经验介绍等栏目外，还设有流行病学·调查报告、口腔预防保健、口腔医学美学等专栏。
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首页>现代口腔医学杂志
- 杂志名称：现代口腔医学杂志
- 主管单位：河北省卫生厅
- 主办单位：河北医科大学口腔医学院
- 国际刊号：1003-7632
- 国内刊号：13-1070/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：河北省科技期刊编辑质量奖期刊收录：国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), CA 化学文摘(美), 上海图书馆馆藏, 知网收录(中)
重组真核表达载体pEGFP-N1/hIL-1ra的构建及其在NIH3T3细胞中的稳定表达
何雅丽；苏毅；王子露；李建民；徐艳
关键词：重组人白细胞介素1受体拮抗剂, 真核表达载体, 稳定转染
摘要：目的 构建重组人白细胞介素1受体拮抗剂(rhIL-1ra)基因真核表达载体pEGFP-N1/hIL-1ra,稳定转染小鼠成纤维细胞(NIH3T3)并检测其表达,为使用细胞因子拮抗剂基因治疗牙周炎奠定实验基础.方法 Trizol法提取人乳腺癌组织总RNA,RT-PCR方法扩增目的 基因.胶回收、纯化后产物与克隆载体pMD18-T连接、转化,测序鉴定正确后将重组克隆载体与真核表达质粒pEGFP-N1分别用HindⅢ和BamHⅠ双酶切,体外连接.重组DNA转化感受态细菌E.coli TOP 10,筛选阳性克隆并鉴定.将构建正确的pEGFP-N1/hIL-1ra重组质粒DNA由脂质体介导转染NIH3T3细胞,G418加压筛选20d,RT-PCR检测基因的表达,ELISA检测蛋白的表达.结果 重组质粒pEGFP-N1/hIL-1ra经PCR及双酶切鉴定均证实人IL-1ra基因已与pEGFP-N1正确重组.稳定转染NIH3T3细胞后,RT-PCR得到目的 基因片段,ELISA检测到目的 蛋白的表达.结论 本实验成功构建了编码人IL-1ra基因的重组质粒pEGFP-N1/hIL-1ra,并获得了稳定表达目的 蛋白人IL-1ra的NIH3T3细胞系,为牙周炎基因治疗的后续研究奠定了实验基础.
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